药品主文件(DMF)中杂质研究浅析

药品主文件(DMF)中杂质研究浅析

　　随着固体制剂、液体注射剂一致性评价的深入开展，原料药(APIs)和辅料(Ingredients)的DMF备案制度也越来越受到关注。虽然药品主文件目前在国内的法规还是空白，但是基于ICH和欧美的制度，我们也可以先行了解到国际政策以及未来我国的执行法规。

　　在1999年11月，FDA出版了简化新药申请：原料药中的杂质(Guidance for Industry ANDAs: Impurities in drug substance)，该指南适用于ANDAs申请、药物主文件(DMF)、原料药的工艺或者合成变更的ANDA补充。该指南规定杂质包含有机杂质(organic impurities)、无机杂质(inorganic impurities) 和残留溶剂(residual solvents)，现本文对有机杂质和无机杂质研究做一个简单的探讨。

有机杂质

　　有机杂质可能会在新原料药的生产过程和(或)存储期间有所增加，这些杂质可能是确定的或者是未确定的、挥发性的或者非挥发性的，它包含：起始物、副产物、中间体、降解产物、试剂/配位剂/催化剂。在原料药中实际存在的表观量大于0.1%的杂质，必须对结构特征进行描述并且鉴定，通常没有必要对表观量0.1%以下的杂质进行鉴定，然而对于那些含量低于0.1%可能产生不寻常功效或者毒性药理作用的潜在杂质，则应力求鉴定它们并且进行基因毒性杂质研究。

　　那如果是在仿制药的杂质研究中，当杂质大于鉴别阈值，首先确认该杂质是否在官方药典中有披露，如果一个特定的杂质不存在于官方药典，建议通过与仿制药参比制剂(RLD)中的杂质检测量来比较确认该杂质，这个杂质接受标准应低于RLD中的限度，其次如果这个杂质有在科学文献上记载或者是原料药的重要代谢物，那么可以根据上述数据对杂质鉴定并控制，如果以上方法都不能鉴别杂质，毒性试验是确认杂质的最后方法。如果毒性试验显示该杂质与临床不良反应有关，那就必须将该杂质降低至安全限度。

　　那么，什么是基因毒性杂质呢？基因毒性杂质是指能直接或者间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌作用的物质。对于基因毒性杂质，ICH M7指南都明确要求充分评估的其风险，控制原料药和药品中基因毒性杂质的残留限度，考察其可接受的摄入量。ICH提出了毒理学关注阈值(threshold of toxicological concern，TTC)，具体含义为在人的一生(70岁)中，每天摄入1.5μg基因毒性杂质，其致癌的风险是可接受的(<1/100 000)。同时该指南根据风险级别将基因毒性杂质分为5类，我们可以根据此项分类，先确定杂质的种类，再依据TTC值来计算该杂质的鉴别阈值，再控制该杂质限度并且建立合适的方法学。

　　在分析方面，检测基因毒性杂质应该重点选择专属性强，灵敏度高、重现性好及准确度高的分析方法，目前较多的方法有气相色谱-质谱连用(GC-MS)、液相色谱-质谱联用(LC-MS)、毛细管电泳-质谱联用(CE-MS) 、液相色谱-核磁共振-质谱联用(LC-NMR/MS)等。

无机杂质

　　无机杂质可能来源于生产过程，它们一般是已知的和确定的，它们包括：试剂、配位体、催化剂、重金属、无机盐、其他物质(过滤介质，活性炭等)。ICH指导委员会于2009年10月批准了Q3D 金属杂质指导原则(Guideline for elemental impurities)。并且通过日允许暴露量PDE标准来评估药品中杂质元素安全性。

　　以往的重金属检测方法采用比色法，依靠视觉，而非毒理，不能准确定量，而且只能给出10种元素总和，不能测其它元素(如铬，铂系)，而且每个元素灵敏度在规定的灵敏度下响应不同，高温(600℃)还会造成某些元素挥发，如汞，而且比色法方法重现比较困难，检测的溶液/标准随着时间变化，有回收率问题，而且存在健康伤害，硫代乙酰胺在欧美不允许使用，他能产生H2S，有剧毒。在新版USP和EP药典中已经将重金属检测项目删除。基于上述问题，2014年美国药典发布了新的重金属控制专论，USP<232>和<233>，明确了多种金属元素的具体限度，对于重金属元素测定方法中的灵敏度、回收率、校准和漂移等均给出了相关规定，并对如何根据元素性质制备样品给出了决策树。ICH Q3D指南中将元素分为4类，并且给出了三种计算方法将PDE至转化成浓度限度，作为工具用于评估药品或其成分中的元素杂质浓度，从而保证药品不会超过PDE值。

　　传统的重金属检查法—比色法已经远远不能满足此类杂质控制的要求，这就需要更加严格的分析方法来实行这项研究，目前有效的方法有ICP-AES(电感耦合等离子体发射光谱)、ICP-MS(电感耦合等离子体质谱)以及GFAAS(石墨炉原子吸收分光光度法)，这些方法可以将元素杂质进行定量分析控制。一旦明确了元素杂质的种类、限度和方法，再进行相关的方法学验证的研究就比较全面了。

文章来源：曹雪春